iTRAQ
iTRAQ技術原(yuan)理：
iTRAQ試(shi)劑為可與氨基酸N端及賴氨酸側鏈連接的胺(an)標記同重元素(isobaric)。在質譜圖(tu)中(zhong)，任何一種iTRAQ試(shi)劑標記的不同樣本中(zhong)的同一蛋(dan)白(bai)質表(biao)現為相同的質荷(he)比(bi)。
在串聯(lian)質譜中，信(xin)號(hao)離子(zi)表(biao)現為不同(tong)質荷比(114～117)的峰，因(yin)此，根據(ju)波峰的高度及面積(ji)，可以得到(dao)蛋白質的定量信(xin)息。
技術特點:
1．可同時標記2~8 個(ge)樣本。
2. iTRAQ技術不僅可發現胞(bao)漿蛋白(bai)，還(huan)有膜蛋白(bai)、核蛋白(bai)、胞(bao)外蛋白(bai)。iTRAQ技術可檢測出低豐(feng)度蛋白、強堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
3.可標記(ji)修飾(shi)(shi)后(hou)的氨(an)基酸(suan)，因此對(dui)磷(lin)酸(suan)化(hua)蛋白等翻譯后(hou)修飾(shi)(shi)蛋白進行定性定量研究(jiu)。
4.報告離子的(de)相對分子質量(liang)(liang)較(jiao)低(113~121)，低分子量(liang)(liang)區(qu)是質譜定(ding)性(xing)(質量(liang)(liang)確(que)定(ding))和定(ding)量(liang)(liang)(豐度比較(jiao))較(jiao)為準確(que)的(de)區(qu)域，因此質譜檢測(ce)更為靈敏可靠。
iTRAQ試劑包括三部分(fen)：
1. 報(bao)告(gao)基團（reporter group）：相對分子量為113-121Da（無120），因此(ci)iTRAQ試(shi)劑可(ke)同時(shi)標記(ji)8組樣品(pin)。
2. 平衡基團（balance group）：相(xiang)對(dui)分(fen)(fen)子量(liang)為(wei)192-184Da (無185)，使得(de)八種iTRAQ試(shi)劑分(fen)(fen)子量(liang)均為(wei)305 Da，保(bao)證(zheng)標(biao)記的同(tong)一肽段m/z相(xiang)同(tong)。
3. 肽(tai)(tai)反(fan)應基(ji)(ji)團：能與肽(tai)(tai)段(duan)N端及賴氨酸(suan)側鏈氨基(ji)(ji)發生共價連(lian)接，從(cong)而標(biao)記(ji)上肽(tai)(tai)段(duan) 拿到蛋白樣品(pin)之后，不同組(zu)的(de)樣品(pin)首先分別進(jin)(jin)行(xing)等(deng)量酶切，每一個酶切得到的(de)肽(tai)(tai)段(duan)樣品(pin)選擇一種標(biao)記(ji)試劑(ji)進(jin)(jin)行(xing)標(biao)記(ji)反(fan)應（每一個肽(tai)(tai)段(duan)至(zhi)少含有(you)一個游(you)離的(de)氨基(ji)(ji)進(jin)(jin)行(xing)反(fan)應）；然后將經過(guo)不同標(biao)記(ji)的(de)肽(tai)(tai)段(duan)樣品(pin)混合后進(jin)(jin)行(xing)后續的(de)質譜分析。
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