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Brdu細胞增殖檢測

BrdU作為一(yi)種胸腺嘧(mi)啶(ding)(ding)核苷(gan)的(de)類似(si)物（其化學結構特(te)點是胸腺嘧(mi)啶(ding)(ding)的(de)堿基嘧(mi)啶(ding)(ding)環上與(yu)5位C原子連接的(de)甲(jia)基被(bei)溴代(dai)替），像胸腺嘧(mi)啶(ding)(ding)核苷(gan)一(yi)樣可摻(chan)入到(dao)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)合成的(de)DNA中(zhong)。當細(xi)(xi)胞(bao)(bao)處于DNA合成期(qi)而同時又有(you)(you)BrdU存在(zai)時, 就(jiu)會有(you)(you)BrdU摻(chan)入新合成的(de)DNA中(zhong)，只要(yao)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)不消亡(wang)，這(zhe)種BrdU就(jiu)在(zai)胞(bao)(bao)核的(de)DNA中(zhong)長期(qi)存留。摻(chan)入到(dao)DNA的(de)BrdU可通(tong)過抗(kang)BrdU單克(ke)隆抗(kang)體在(zai)組(zu)織切片或細(xi)(xi)胞(bao)(bao)爬片上顯示。該方法能對細(xi)(xi)胞(bao)(bao)增值進(jin)行迅速而穩定的(de)測量, 而且(qie)標記(ji)BrdU的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)只要(yao)不受(shou)到(dao)紫外線照射，對細(xi)(xi)胞(bao)(bao)本(ben)身沒(mei)有(you)(you)功能損害。
 
操(cao)作步驟
1. 細胞(bao)(bao)以1.5×105 /ml細胞(bao)(bao)數接(jie)種于(yu)直徑35ml培(pei)養皿中（內(nei)放置一蓋玻(bo)片），培(pei)養1天(tian)，用(yong)含0.4％FCS培(pei)養液(ye)同步化3天(tian)，使絕大多數細胞(bao)(bao)處于(yu)G0 期。
2. 終止細胞培養(yang)前(qian)，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵(fu)育40min。
3. 棄培養液(ye)，玻片用PBS洗滌3次。
4. 甲醇/醋(cu)酸固(gu)定10min。
5. 經固定的玻片(pian)空氣干燥，0.3％H2 O2 -甲(jia)醇(chun)30min滅(mie)活(huo)內(nei)源(yuan)性氧化酶。
6. 5％正(zheng)常兔(tu)血(xue)清封(feng)閉。
7. 甲(jia)酰胺100℃，5min變(bian)性核酸。
8. 冰浴(yu)冷卻(que)后PBS洗(xi)滌，加1抗(kang)(kang)即抗(kang)(kang)小鼠(shu)BrdU單(dan)抗(kang)(kang)（工(gong)作濃度1：50），陰性(xing)對照加PBS或血(xue)清(qing)。
9. 按ABC法(fa)進(jin)行檢測，蘇木(mu)素(su)或伊紅襯(chen)染，在(zai)顯微鏡下隨機(ji)計數10個高倍視(shi)野中細胞(bao)總數及(ji)BrdU陽性(xing)細胞(bao)數，計算(suan)標(biao)記指數（LI）。
客戶提供
1. 提供新鮮(xian)的肝素(su)或者EDTA抗凝的外(wai)周血；
2. 提供新(xin)鮮的(de)培養細胞(bao)，提供新(xin)鮮組織，需要實驗(yan)室制備成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸液。
 
我們提供
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【本(ben)公司(si)合作項目】
慢病(bing)毒(du)，腺(xian)病(bing)毒(du)，RNAi類，分子生物實(shi)驗(yan)(yan)，病(bing)理實(shi)驗(yan)(yan)，免疫學實(shi)驗(yan)(yan)，細胞實(shi)驗(yan)(yan)，動物實(shi)驗(yan)(yan)，蛋白組學實(shi)驗(yan)(yan)等，能夠進行藥效(xiao)學(xue)評價(jia)、毒(du)理(li)學(xue)評價、細胞藥篩、動物(wu)建模、病(bing)理(li)檢(jian)測(ce)、蛋(dan)白組(zu)學、代謝組(zu)學、高通量(liang)測(ce)序、ChIP、CO-IP、生物(wu)信(xin)息學分(fen)析服務！

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Brdu細胞增殖檢測