產品介紹：

熒光原位雜(za)交/FISH技術服務

服(fu)務(wu)原理 ：

熒光(guang)原位雜(za)(za)(za)交(jiao)（Fluorescence in situ hybridization FISH）的(de)(de)(de)基本(ben)原理是用已知(zhi)的(de)(de)(de)標記(ji)單(dan)(dan)鏈核酸(suan)為探(tan)針，按照(zhao)堿基互補的(de)(de)(de)原則，與待檢(jian)材料(liao)中未知(zhi)的(de)(de)(de)單(dan)(dan)鏈核酸(suan)進(jin)行(xing)特(te)異性(xing)(xing)結(jie)合，形(xing)成(cheng)可(ke)被檢(jian)測的(de)(de)(de)雜(za)(za)(za)交(jiao)雙鏈核酸(suan)。由于(yu)DNA分子(zi)在(zai)染(ran)(ran)色(se)體上(shang)是沿著染(ran)(ran)色(se)體縱軸呈線性(xing)(xing)排(pai)列，因而可(ke)以(yi)將(jiang)探(tan)針直接與染(ran)(ran)色(se)體進(jin)行(xing)雜(za)(za)(za)交(jiao)從而將(jiang)特(te)定(ding)的(de)(de)(de)基因在(zai)染(ran)(ran)色(se)體上(shang)定(ding)位。與傳(chuan)(chuan)統的(de)(de)(de)放射性(xing)(xing)標記(ji)原位雜(za)(za)(za)交(jiao)相比，熒光(guang)原位雜(za)(za)(za)交(jiao)具有快速、檢(jian)測信(xin)號強、雜(za)(za)(za)交(jiao)特(te)性(xing)(xing)高和可(ke)以(yi)多重(zhong)染(ran)(ran)色(se)等特(te)點，因此在(zai)分子(zi)細(xi)胞遺(yi)傳(chuan)(chuan)學領域受到普遍(bian)關注。

服務簡介：

      雜交所(suo)用的探針大致可以分為三類：（1）染色體特(te)(te)異(yi)重(zhong)復(fu)序(xu)列探(tan)針；（2）全(quan)染色體或(huo)染色體區域特(te)(te)異(yi)性探(tan)針；（3）特(te)(te)異(yi)性位置(zhi)探(tan)針，由一個或(huo)幾(ji)個克隆序(xu)列組(zu)成。探(tan)針的熒光素標記(ji)可以采(cai)用直(zhi)接(jie)和間接(jie)標記(ji)的方法。間接(jie)標記(ji)是采(cai)用生(sheng)物系標記(ji)的dUTP(biotin-dUTP)經過缺口平(ping)移法進行標記(ji)；而直(zhi)接(jie)標記(ji)法是將熒光素直(zhi)接(jie)與探(tan)針核(he)苷酸(suan)蔌磷酸(suan)戊(wu)糖骨架共(gong)價(jia)結合，或(huo)在缺口平(ping)移法標記(ji)探(tan)針時將熒光素核(he)苷三(san)磷酸(suan)摻(chan)入(ru)。

服(fu)務(wu)流(liu)程(cheng)：

一、探針及標本的變性
（1）探(tan)針變(bian)性(xing)(xing)：將探(tan)針在75℃怛溫水浴(yu)中溫育5min，立(li)即置0℃，5～10min，使(shi)雙鏈DNA探(tan)針變(bian)性(xing)(xing)。

（2）標本變性：

①將制備好的染色(se)體玻(bo)片標(biao)本于50℃培養箱中(zhong)烤(kao)片2～3h。（經(jing)Giemsa染色(se)的標(biao)本需預先在固定(ding)液中(zhong)退(tui)色(se)后再烤(kao)片）。

②取出玻片標本(ben)，將其(qi)浸在70～75℃的體積分數70%甲酰胺/2×SSC的變性液(ye)中變性2～3min。
③立即按順(shun)序將標本經體(ti)(ti)積分(fen)數70%、體(ti)(ti)積分(fen)數90%和體(ti)(ti)積分(fen)數100%冰乙(yi)醇系(xi)列(lie)脫水，每次(ci)5min，然后空氣(qi)干(gan)燥。
二(er)、雜交:
將已變(bian)性或預退火(huo)的(de)DNA探針(zhen)10mL滴于(yu)已變(bian)性并脫水的(de)玻片(pian)(pian)(pian)標本上，蓋(gai)(gai)上18×18蓋(gai)(gai)玻片(pian)(pian)(pian)，用Parafilm封片(pian)(pian)(pian)，置(zhi)于(yu)源(yuan)潮(chao)濕暗盒中(zhong)37℃要(yao)交過夜（約15～17h）。由于(yu)雜交液較少，而且(qie)雜交溫(wen)度較高，持續時間(jian)又長，因此為了保持標本的(de)濕潤狀態，此過程(cheng)在濕盒中(zhong)進行。
三、洗脫：此步驟有助于除去非特異(yi)性(xing)結合的探(tan)針，從而(er)降低本底。
（1）雜交次日，將標(biao)本從(cong)37℃溫箱中取出，用刀片輕輕將蓋(gai)玻片揭掉(diao)。
（2）將已雜交的(de)玻片(pian)標本放置于已預熱42～50℃的(de)體積(ji)分數50%甲酰胺/2×SSC中洗滌3次(ci)，每次(ci)5min。
（3）在已預熱42～50℃的1×SSC中洗滌(di)3次(ci)，每次(ci)5min。
（4）在室溫下，將玻片標本2×SSC中輕洗(xi)一(yi)下。
四、雜交(jiao)信號的(de)放大:
（1）在玻片的雜交部(bu)位(wei)加(jia)150mL封(feng)閉(bi)液(ye)I，用保鮮膜覆蓋，37℃溫育20min。
（2）去(qu)掉保(bao)鮮(xian)(xian)膜(mo)，再加150mL avidin-FITC于(yu)標本(ben)上，用保(bao)鮮(xian)(xian)膜(mo)覆蓋，37℃繼續溫育40min。
（3）取出標本，將(jiang)其放入已預熱(re)42～50℃的洗(xi)脫液中洗(xi)滌3次，每(mei)次5min。
（4）在玻片(pian)標本(ben)的雜交(jiao)部位加(jia)150mL封(feng)閉液II，覆蓋保鮮膜，37℃溫育20min。
（5）去掉保(bao)鮮膜，加150mL antiavidin于標本上，覆蓋新的保(bao)鮮膜，37℃溫育40min。
（6）取出標(biao)本，將其放入已預熱42～50℃的新洗(xi)脫液(ye)中，洗(xi)滌3次(ci)，每次(ci)5min。
（7）重復步驟（1）、（2）、（3），再于2×SSC中室溫清洗一下。
（8）取出玻片(pian)，自然干(gan)燥。
（9）取(qu)200mL PI/antifade染液滴加在(zai)玻片(pian)標本上，蓋上蓋玻片(pian)。
五、封片(pian):
  可(ke)(ke)采用不同(tong)類型(xing)的(de)(de)封(feng)片(pian)(pian)液。如果(guo)封(feng)片(pian)(pian)中不含有Mowiol（可(ke)(ke)使封(feng)片(pian)(pian)液產生自封(feng)閉作用），為防止蓋片(pian)(pian)與載片(pian)(pian)之間的(de)(de)溶液揮發，可(ke)(ke)使用指甲油將蓋片(pian)(pian)周圍封(feng)閉。封(feng)好(hao)的(de)(de)玻(bo)片(pian)(pian)標本可(ke)(ke)以在-20～-70℃的(de)(de)冰(bing)箱中的(de)(de)暗盒中保持數月之久。
六(liu)、熒光顯微鏡(jing)觀察FISH結果(guo):
先在(zai)可見(jian)光源下找到具有細胞分裂相(xiang)的(de)(de)(de)視野，然(ran)后(hou)打(da)開(kai)熒光激(ji)發(fa)光源，FITC的(de)(de)(de)激(ji)發(fa)波(bo)長為(wei)490nm。細胞被PI染(ran)成紅色(se)，而經FITC標記(ji)的(de)(de)(de)探(tan)針的(de)(de)(de)探(tan)針所(suo)在(zai)位置(zhi)發(fa)出綠色(se)熒光。由于(yu)本實驗使(shi)用的(de)(de)(de)是Y染(ran)色(se)體上的(de)(de)(de)特異(yi)序列，因此在(zai)男性外周血染(ran)色(se)體標本的(de)(de)(de)雜交中(zhong)呈(cheng)陽性，即使(shi)在(zai)末分裂的(de)(de)(de)細胞中(zhong)，也可以(yi)觀察到明顯的(de)(de)(de)雜交信號。照相(xiang)記(ji)錄實驗結果。

收費(fei)標準(zhun)/服(fu)務周期/提供(gong)結果：
詳談，我們會根據您(nin)的方案及需求(qiu)制定詳細(xi)的服(fu)務協(xie)議。

【本公(gong)司合作項目】
慢病(bing)毒(du)，腺(xian)病(bing)毒(du)，RNAi類，分子生物實驗，病(bing)理實驗，免疫學(xue)(xue)實驗，細(xi)胞(bao)實驗，動物實驗，蛋(dan)白(bai)組學(xue)(xue)實驗等，能夠進行藥效學評價(jia)、毒理學評價、細胞藥篩、動物(wu)建(jian)模、病理(li)檢測、蛋白組學(xue)(xue)、代謝組學(xue)(xue)、高通量(liang)測序、ChIP、CO-IP、生物(wu)信息(xi)學(xue)(xue)分(fen)析服務！

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