產品介紹：

原(yuan)位雜(za)交

服務簡介(jie)：

    原(yuan)(yuan)位(wei)(wei)雜(za)(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)組織(或(huo)(huo)細胞(bao))化學 (In situ Hybridization Histochemistry, ISHH) 簡稱原(yuan)(yuan)位(wei)(wei)雜(za)(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)(In Situ Hybridization)，屬于固相分(fen)(fen)子雜(za)(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)的(de)范疇，它是(shi)用(yong)標記的(de)DNA或(huo)(huo)RNA為探(tan)(tan)針，在原(yuan)(yuan)位(wei)(wei)檢(jian)測組織細胞(bao)內特(te)定(ding)核酸(suan)序列的(de)方法。根據所用(yong)探(tan)(tan)針和(he)靶(ba)核酸(suan)的(de)不同，原(yuan)(yuan)位(wei)(wei)雜(za)(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)可(ke)(ke)分(fen)(fen)為DNA-DNA雜(za)(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)，DNA-RNA雜(za)(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)和(he)RNA-RNA雜(za)(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)三類(lei)。根據探(tan)(tan)針的(de)標記物是(shi)否直接(jie)被檢(jian)測，原(yuan)(yuan)位(wei)(wei)雜(za)(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)又可(ke)(ke)分(fen)(fen)為直接(jie)法和(he)間接(jie)法兩類(lei)。直接(jie)法主要(yao)用(yong)放(fang)射性同位(wei)(wei)素、熒光及某些酶(mei)標記的(de)探(tan)(tan)針與靶(ba)核酸(suan)進行雜(za)(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)，雜(za)(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)后分(fen)(fen)別通(tong)過(guo)放(fang)射自顯影、熒光顯微(wei)鏡術或(huo)(huo)成(cheng)色酶(mei)促反應(ying)直接(jie)顯示。間接(jie)法一般用(yong)半抗原(yuan)(yuan)標記探(tan)(tan)針，zui后通(tong)過(guo)免疫組織化學法對半抗原(yuan)(yuan)定(ding)位(wei)(wei)，間接(jie)地顯示探(tan)(tan)針與靶(ba)核酸(suan)形成(cheng)的(de)雜(za)(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)體。

服務流(liu)程(cheng)：

1. 根據客(ke)戶送(song)的樣(yang)本(ben)（固(gu)定好或者包(bao)埋好），以(yi)及樣(yang)本(ben)類型，安排實驗(yan)

2.包埋或(huo)者切片(pian)后，根據客戶(hu)所測(ce)指標，設計特異(yi)性探針，標記(ji)示(shi)蹤(zong)物。然后進行一系列反(fan)應。

3.（可(ke)選）根據上述(shu)所做好的切片進行(xing)拍片，分為熒光顯(xian)(xian)微鏡(jing)（激光共聚焦顯(xian)(xian)微鏡(jing)）或(huo)普通(tong)光學(xue)顯(xian)(xian)微鏡(jing)

4.（可選(xuan)）針對做(zuo)好(hao)的(de)玻片進行分析(xi)，分析(xi)時選(xuan)取較好(hao)的(de)區域，分析(xi)三個視(shi)野

5.提供實(shi)驗(yan)報告：包(bao)括詳(xiang)細的(de)實(shi)驗(yan)方(fang)法(fa)及(ji)原位(wei)雜交實(shi)驗(yan)結果的(de)相關圖(tu)表(biao) 

操作步驟：

   取材(cai)：
    ● 0.1M PBS (pH 7.2) 浸 5-10min。
    ● 0.1M甘(gan)氨(an)酸/0.1M PBS 浸5min。
    ● 0.3%TritonX-100/0.1M PBS 浸(jin)10-15min。
    ● 0.1M PBS 洗 5min×3次，加蛋(dan)白(bai)酶K(1μg/ml)，37℃孵育30 min。
    ;● 4%多(duo)聚甲醛浸(jin)5min。
    ● 0.1M PBS 洗 5min×2次，浸(jin)入新(xin)鮮配制(zhi)的含(han)0.25%乙酸(suan)酐/0.1M三乙醇(chun)胺中(zhong)10min。
    預雜(za)交：滴加(jia)適量預雜(za)交液，42℃ 30 min。
    雜交(jiao)：傾去預雜交(jiao)液(ye)，在每張切片(pian)上滴加10-20μl雜交(jiao)液(ye)（將(jiang)探針(zhen)變性后稀(xi)釋在預雜交(jiao)液(ye)中，0.5 ng/μl ），覆以蓋玻片(pian)或(huo)蠟膜(mo)，42℃ 過夜。（陰(yin)性對照）
 ;   洗片：(1) 4×SSC、2×SSC、1×SSC、0.5×SSC 37℃各洗20min；0.2×SSC 37℃洗10min；0.2×SSC與(yu)0.1M PBS各半洗10min；0.05M PBS 洗 5min×2次。
    ● 3% BSA/0.05M PBS 包被，37℃ 30min.
    ● 滴加抗(kang)地(di)高(gao)辛-抗(kang)血清堿性磷酸酶(mei)復(fu)合物（以抗(kang)體稀釋液1:5000稀釋）4℃孵育過夜。
  ;  ;● 0.05M PBS洗(xi)15min×4次(ci); TSM1 10min×2次(ci); 新鮮配制TSM2 10min×2次(ci)。
    ;顯色：在(zai)玻片上滴加適量顯色液，4℃避光(guang)過夜。
    ● 將玻片置(zhi)于TE中10-30min以終止(zhi)反應。
    ● 酒(jiu)精梯度(du)脫水、二(er)甲苯脫脂。
    ● 中性樹膠封(feng)片(pian)，顯微(wei)鏡下觀察結果

交貨內容：

完整的實(shi)驗(yan)(yan)報告(gao)，包(bao)括實(shi)驗(yan)(yan)過(guo)程、所(suo)用儀器(qi)試(shi)劑、蠟塊玻片(pian)和相關分析(xi)數據

收費標準/服務周(zhou)期/提供結果：
詳談，我們會(hui)根據您(nin)的(de)方案(an)及需(xu)求(qiu)制定詳細的(de)服務協議(yi)。

【本(ben)公(gong)司合作項目】
慢病毒(du)，腺病毒(du)，RNAi類(lei)，分子生物實驗(yan)(yan)，病理實驗(yan)(yan)，免疫(yi)學實驗(yan)(yan)，細胞實驗(yan)(yan)，動(dong)物實驗(yan)(yan)，蛋白(bai)組學實驗(yan)(yan)等，能夠進行(xing)藥效學(xue)評價、毒理(li)學(xue)評價、細(xi)胞藥篩、動(dong)物建模、病理檢測(ce)、蛋白組學(xue)、代(dai)謝組學(xue)、高通(tong)量(liang)測(ce)序、ChIP、CO-IP、生物信息學(xue)分(fen)析服(fu)務！

詳情請咨詢(xun)：

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