mRNA實(shi)時定(ding)量PCR技術服務
mRNA熒光定量PCR/RT-PCR/實時熒光定量pcr/QPCR/熒光定量PCR/PCR
檢測方法：
染料法（SYBR Green I）
探針(zhen)法（Taqman probe）
實(shi)(shi)時(shi)熒光(guang)定(ding)量(liang)(liang)PCR技術即是在(zai)PCR反應體系中加入熒光(guang)基團，利用熒光(guang)信(xin)號實(shi)(shi)時(shi)監(jian)測(ce)整(zheng)個PCR進(jin)程，zui后通過標準曲(qu)線對未知(zhi)模板進(jin)行定(ding)量(liang)(liang)分析的(de)方(fang)法。實(shi)(shi)時(shi)熒光(guang)定(ding)量(liang)(liang)PCR避免了傳統PCR以(yi)終產(chan)物檢測(ce)定(ding)量(liang)(liang)產(chan)生的(de)偏差(cha)(cha)，提高實(shi)(shi)驗的(de)重(zhong)復(fu)性。該(gai)技術已被廣泛用于檢測(ce)細胞(bao)mRNA表(biao)達(da)量(liang)(liang)的(de)變化、比較不同組織的(de)mRNA表(biao)達(da)差(cha)(cha)異、驗證基因芯片和siRNA干(gan)擾的(de)實(shi)(shi)驗結果。
mRNA實時定(ding)量PCR技術服務(wu)流(liu)程
1. 設計(ji)并合(he)成Realtime PCR引(yin)物
2. 引物(wu)溶解后(hou)使用Promega的TaqDNA聚合酶(mei)進行(xing)含SG（SYBR® Green）的PCR反應的優化。
3. RNA抽提
a. 若(ruo)實(shi)驗對(dui)象為組(zu)織樣(yang)品(pin)，取(qu)適量（50-100mg）新鮮組(zu)織樣(yang)品(pin)或正確保存的組(zu)織樣(yang)品(pin)，加(jia)1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），勻漿后(hou)抽提RNA。
b. 若實驗(yan)對象為細(xi)胞樣(yang)品，每份樣(yang)品取1×106～1×107細(xi)胞，*吸去培養液(ye)后(hou)加1ml的RNA抽提(ti)試劑Trizol（Invitrogen），裂解后(hou)抽提(ti)RNA。
4. RNA質量檢(jian)測
a. 紫外吸收測定法測定RNA在分(fen)光光度計260nm和280nm處的吸收值，以計算其(qi)濃度并(bing)評估RNA純度。
b. 使用甲醛電泳試(shi)劑（ambion）進行變性瓊脂糖(tang)凝膠電泳，檢測RNA純度及完整性。
5. cDNA合成(cheng)
按照逆(ni)轉錄酶（Invitrogen或Promega）使用說明將樣品RNA逆(ni)轉錄為cDNA。
6. 制備標準(zhun)曲線(xian)樣品(可選)
進(jin)(jin)行(xing)相對定(ding)量，需要(yao)先(xian)將樣品的目的基(ji)因以及(ji)管家基(ji)因進(jin)(jin)行(xing)PCR擴增， 其產物進(jin)(jin)行(xing)梯度稀釋用于做標準曲(qu)線。
7. 實(shi)時定量PCR
標準曲線樣品(pin)(pin)和待測樣品(pin)(pin)分別(bie)加(jia)入到含SG的RealTime PCR反應液中(zhong)(zhong)（其中(zhong)(zhong)TaqBead熱啟動(dong)聚合(he)酶來自Promega公司），進(jin)行RealTime PCR擴(kuo)增(zeng)和檢測
8. 數據分析
檢(jian)測結果(guo)進行標(biao)準曲(qu)線分(fen)析，以對(dui)待測樣品的目(mu)的基(ji)因(yin)進行定(ding)量(liang)。相對(dui)定(ding)量(liang)實驗需要進一(yi)步用(yong)樣品的目(mu)的基(ji)因(yin)測得值(zhi)除以管(guan)家基(ji)因(yin)測得值(zhi)以校正(zheng)誤(wu)差，所(suo)得結果(guo)代表某樣品的目(mu)的基(ji)因(yin)相對(dui)含量(liang)。
提(ti)供實(shi)驗報告(gao)：包括詳細的(de)實(shi)驗方法及(ji)實(shi)時(shi)熒光定量PCR實(shi)驗結果及(ji)相(xiang)關圖表。
收費標準/服務周期/提供(gong)結果：
詳談，我(wo)們(men)會根據您的(de)方案及(ji)需求(qiu)制定詳細的(de)服務協(xie)議。
【本(ben)公(gong)司合作(zuo)項目】
慢病毒(du)，腺病毒(du)，RNAi類，分子(zi)生物(wu)(wu)實(shi)(shi)(shi)驗，病理實(shi)(shi)(shi)驗，免疫(yi)學實(shi)(shi)(shi)驗，細胞實(shi)(shi)(shi)驗，動物(wu)(wu)實(shi)(shi)(shi)驗，蛋(dan)白組學實(shi)(shi)(shi)驗等，能(neng)夠進(jin)行藥(yao)效學評(ping)價、毒理學評(ping)價、細(xi)胞藥篩(shai)、動物(wu)(wu)建模、病理檢測(ce)、蛋白組學(xue)、代謝組學(xue)、高通量測(ce)序、ChIP、CO-IP、生物(wu)(wu)信(xin)息學(xue)分析(xi)服務！
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